PCR diagnostika - analýza infekce


Polymerázová řetězová reakce (PCR) - vysoce přesná metoda molekulárně-genetická diagnostika, která umožňuje osoba odhalit různé infekčních a dědičné onemocnění, akutních i chronických jeviště a dlouho předtím, než se nemoc může projevit.

Polymerázová řetězová reakce (PCR), v roce 1983 vyvinul Myullisa Cary (USA), za což v roce 1993 mu byla udělena Nobelova cena za chemii.

PCR analýza pro většinu infekcí stala jakousi "zlatý standard". Většina odborníků tváří v tvář s ním téměř každý den, a nedokážu si představit, aniž by definitivní diagnózy. PCR se často stává jedinou reakcí identifikovat aktivní stadia nemoci v těch chvílích, kdy jiní selhávají bakteriologickou, virologických, imunologickou diagnostické metody.


Výhody PCR diagnostiky v moderní medicíně:

• přímá detekce přítomnosti patogenu (tj specifických oblastech patogenů DNA nebo RNA), ve vzorku.
• Vysoká specificita může určit jedinečný úsek DNA nebo RNA specifické pro patogenu, což eliminuje možnost falešných reakcích.
• Vysoká citlivost PCR umožňuje detekovat i jednotlivé buňky patogenů (viry, bakterie). Citlivost PCR analýzy je 10 - 1000 buněk ve vzorku (např, citlivost a imunologické testy mikroskopických - pouze 103 až 105 buněk).

• Vývoj Universal PCR metody pro detekci různých patogenů. Předmětem studie pro PCR je genetický materiál (DNA, RNA), parazita. Tato technika může detekovat více patogenů z biologického vzorku.
• docela rychlé výsledky testů. Plná výzkum prováděný za 4 až 4,5 hodin, alespoň - někteří déle.
• Schopnost identifikovat patogenů ke vzniku příznaků (předklinické diagnóza) a po uplynulém onemocnění (retrospektivní diagnóza). Příklady preklinické diagnóza budou zkoumány v inkubační době (od doby infekce pacienta stížností) a latentní infekce (když žádné příznaky vůbec, ale tam je laboratorní důkaz - PCR, například). Jedním z vrcholů je diagnostická PCR PCR v archivního materiálu nebo biologických zbytků důležitých pro identifikaci nebo otcovství.

V současné době PCR diagnostika je výrazně vývoj. Tam je zlepšení způsobu, znovu a znovu, tam jsou nové typy PCR, lékařská trh vstupuje nový testovací systém pro tuto reakci. Tato cenově PCR studie každý rok se stává přístupný pro široký okruh pacientů.

Co na bázi PCR

Základem polymerázové řetězové reakce se opakuje zdvojnásobení (amplifikace) určitých úseků DNA nebo RNA, enzymy v laboratoři. Výsledkem je množství DNA nebo RNA, postačující pro vizuální analýzou. Studie se zkopíruje pouze část, která se hodí specifikovaných podmínek, a to pouze v přítomnosti jeho situace ve studovaném vzorku.

Například, materiál pro tuto studii, která poskytuje na přítomnost fragmentů DNA nebo RNA patogenu (slin, krve, moči, výtokem z genitálií), které ve zvláštní reaktoru (termocyklerů). Vedle toho se přidají specifické enzymy, které se vážou na patogenní DNA nebo RNA, a syntézu kopií. Tato kopie je jen pár kroků typu "řetězovou reakci", a skončit s jednou kopií genetického materiálu může produkovat stovky nebo tisíce kopií. Pak přijde na analýzu a porovnání výsledků s dostupných databází o struktuře různých patogenů. Pomocí PCR může nejen identifikovat typ patogenu, ale také, aby kvantitativní výsledky analýzy, tedy tolik patogenů u lidí.

PCR je nyní rozšiřuje spektrum možností studia: zavedení mutací, fúze fragmentů DNA a rozšířený v medicíně, například, založit otcovství, vznik nových genů a více.

Co infekce mohou být detekovány pomocí PCR diagnostika

1) HIV (dokáže detekovat virus lidské imunodeficience HIV-1)
2) Virová hepatitida A, B, C, G (RNA-HAV, HBV DNA, RNA-HCV RNA-HGV)
3) Infekční mononukleóza (DNA virus Epstein-Barrové -VEB)
4) Tsytomehalovyrusnaya infekce (DNA-CMV)

5) Herpetické infekce (virus herpes simplex DNA HSV 1 a 2)
6) STI (infekce, sexuálně přenosných infekcí) - ureaplasmosis, gardnerellez, chlamydie, mykoplazmózy, trichomoniáza,
7) Tuberkulóza (Mycobacterium tuberculosis)
8) onkogenních virů - virová infekce (lidský papilloma virus (včetně jeho onkogenních typů 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, a 59)
9) borelióza, klíšťová encefalitida
10) Listerióza
11) kandidóza (houby rodu Candida)
12) pylori (Helicobacter pylori)

a další

Vzhledem k různým patogenů PCR diagnostika je široce používán v gynekologických, urologických praxe, praxe, infekční choroby, v pulmonology, tuberkulózy, gastroenterologie, hematologie, onkologie a další.

Materiál pro studium a pravidel plotu

Materiál pro studii PCR, které mohou detekovat v cizí DNA bakterie nebo DNA nebo RNA může sloužit i pro řadu biologických tekutin a environmentálních práv: hlenu, moči, krve, sputa, stěry epitelové buňky, tkáně placenty, krve, prostaty džus, plodové vody, pleurální tekutiny.

Vyšetření na infekce, sexuálně přenosných infekcí (STI) mezi muži a ženami vyšplhat výtok z genitálií tamponem nebo stěr z děložního čípku, škrábání nebo tampónu z močové trubice (močové trubice), moč.

Vyšetření na infekce (herpes infekce, CMV, mononukleóza, toxoplazmóza, hepatitida B a C, HIV infekce), PCR krví přijata.

Pro diagnostiku infekční mononukleózy, CMV, herpes infekce krku tamponem se bere pro testování na CMV - moči. Často se pro průzkum na nervový systém v řadě studií přijatých mozkomíšní mok.

V Pulmonologie materiálu je sputum, pleurální tekutina.

Zkouška na intrauterinní infekci - plodové vody, placentární tkáně.

Příprava k uloženému materiálu a PCR diagnostiky

Téměř všichni pacienti, kteří provádějí PCR diagnostiku, spolehnout na spolehlivé, přesné a rychlé výsledky, což do značné míry závisí na schopnosti laboratoře, profesionální laboratorní lékaři. Nicméně, mnozí si nemyslím, že je to důvěryhodnost značné míry závisí na nás, a to na doporučení ošetřujícího lékaře, životní styl a přesné sběru materiálu. V kolekci materiálních nezbytných podmínek, které brání kontaminaci (znečištění) materiálu, a proto zpochybňují objektivitu analýzy.

Správná příprava na dodávku materiálu, nepředstavuje velké potíže. Následující doporučení lékařů pro pacienty:

1) byly sexuálně aktivní ve dne na dodávku materiálu;
2) ke studiu krev objeví ráno na lačný žaludek (nejíst, nepít);
3) v době, kdy shromáždí moči v ranním části první čisté sterilní nádoby.

Podmínky připravenost PCR analýza

Konečný výsledek je připraven v 1,5-2h dnů ode dne doručení materiálu. V některých případech, výsledek je připraven v první den.

Vysvětlení PCR

Negativní PCR výsledek ukazuje, že testovaná látka v době dodání nebyl nalezen žádnou stopu infekčních agens. Většina případů nevykazuje žádnou infekci, která se snažila najít ve vzorku studie.

Pozitivní PCR ukazuje na detekci známky infekce při studiu biologickém vzorku. S velkou přesností pozitivní výsledek ukazuje na přítomnost infekce v daném okamžiku.

Existují situace, kdy PCR zjištěny pozitivní pro aktivní infekce a nemůže mluvit - takzvaný "zdravý nosič" s žádné klinické příznaky choroby, která nevyžaduje léčbu, ale vyžaduje sledování lékařem. Tam je více v řadě virových infekcí (HPV, CMV, EBV infekce, herpes infekce, atd.) V materiálech, jako jsou sliny, stírací čípku děložního, močové trubice, tedy lokální zaměření. Ale nemůžeme zapomenout, že přenosu médií dostupných na zdravé lidi jako přechod do chronické formy onemocnění s procesu aktivace. Pokud PCR pozitivní krve, není nosič a vyžaduje zvláštní zacházení.

Kvantitativní PCR je hodnocena lékařem individuálně pro konkrétní infekce odděleně a není sdílen přechody. Kvantitativní PCR lékaře na základě lze stanovit stupeň aktivity infekce a půdu onemocnění, která určitě vliv na průběh a určené dávky léků.

Jedním z posledních zajímavých otázek: jak přesný PCR diagnóza?

Pro PCR analýzy, existují 3 definice:

1. Přesnost (s vysokou pravděpodobností mohou určit či absence infekce).

2. specifičnost (přesnost detekce konkrétní infekci).
3. Citlivost (dokonce i při nízkém obsahu genetického materiálu patogenů ve vzorku se detekuje infekce).

Polymerázová řetězová reakce prakticky nedává falešné poplachy (tj není žádná pozitivní testy, kde žádná infekce). Falešně negativní výsledky jsou vzácné (často je to kvůli nedostatku aktivní infekce u lidí v tuto chvíli). Například, latentní infekce, chronické infekce mimo činnost.